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CPHI制藥在線 資訊 單細(xì)胞RNA性能分析新方法

單細(xì)胞RNA性能分析新方法

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  2018-08-27
人體由130億個(gè)細(xì)胞按不同功能、分門(mén)別類(lèi)順序組成,每個(gè)細(xì)胞都有其獨(dú)特的分子“指紋”,即使是坐落于同一族群之中的細(xì)胞也可以彼此不同。并且它們的活動(dòng)也會(huì)隨時(shí)間變化。

       人體由130億個(gè)細(xì)胞按不同功能、分門(mén)別類(lèi)順序組成,每個(gè)細(xì)胞都有其獨(dú)特的分子“指紋”,即使是坐落于同一族群之中的細(xì)胞也可以彼此不同。并且它們的活動(dòng)也會(huì)隨時(shí)間變化。單細(xì)胞分析工具的應(yīng)運(yùn)而生就是為了解決細(xì)胞-細(xì)胞間非均質(zhì)的復(fù)雜機(jī)制。正如德國(guó)慕尼黑大學(xué)(LMU)分子生物學(xué)家Wolfgang Enard教授在他們新發(fā)表的論文寫(xiě)道“單細(xì)胞技術(shù)對(duì)生命科學(xué)來(lái)說(shuō)是一場(chǎng)變革,”他的課題組利用這項(xiàng)技術(shù)最近剛在《Molecular Cell》發(fā)表了一篇文章。

       mRNA是細(xì)胞用于將DNA遺傳信息轉(zhuǎn)化為編碼蛋白的轉(zhuǎn)錄本,它們是核糖體構(gòu)建細(xì)胞實(shí)體的基本藍(lán)圖。因此,每個(gè)細(xì)胞的mRNA列表相當(dāng)于該細(xì)胞正在合成的蛋白質(zhì)列表,可以提示細(xì)胞當(dāng)時(shí)的功能和狀態(tài)。通過(guò)鑒定當(dāng)時(shí)處于活躍的基因,也可以從側(cè)面反映基因是被如何調(diào)控的,特別是在疾病或感染等特殊時(shí)期。

       測(cè)序單個(gè)細(xì)胞內(nèi)所有mRNA是一項(xiàng)艱巨的任務(wù),具體實(shí)施涉及幾種不同方法。一切方法需要先始于利用逆轉(zhuǎn)錄酶將分離的mRNAs反轉(zhuǎn)錄為DNA,然后擴(kuò)增DNA拷貝進(jìn)行序列分析。Enard和同事系統(tǒng)地修改了其中一種方法,scRNA-seq(單細(xì)胞RNA條形碼測(cè)序),顯著提高了這項(xiàng)技術(shù)的靈敏度。“訣竅是補(bǔ)充和提高逆轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)試劑的稠度,使更多RNA分子轉(zhuǎn)錄成DNA鏈,”Enard解釋。“稠度上升導(dǎo)致分子擁擠,加速反應(yīng)。”第二個(gè)改進(jìn)是減少某些優(yōu)先DNA擴(kuò)增的發(fā)生率,這些物質(zhì)會(huì)扭曲原始RNA表達(dá)。

       單細(xì)胞測(cè)序方法對(duì)實(shí)現(xiàn)人類(lèi)細(xì)胞地圖(Human Cell Atlas)是必不可少的。Enard的目標(biāo)是使他們的新技術(shù)加入人類(lèi)細(xì)胞地圖國(guó)際項(xiàng)目,該項(xiàng)目的規(guī)模與人類(lèi)基因組計(jì)劃相當(dāng)。它的目標(biāo)是根據(jù)特定的基因活動(dòng)模式,組裝所有人類(lèi)細(xì)胞類(lèi)型目錄。該項(xiàng)目將極大地?cái)U(kuò)大我們對(duì)人類(lèi)生物學(xué)和人類(lèi)疾病起源的認(rèn)識(shí)。

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