銀杏葉提取物（GBE）是銀杏科植物銀杏的干燥葉經(jīng)加工制成的提取物，化學成分復雜。目前已從中分離到黃酮類化合物、萜類內(nèi)酯、、聚戊烯醇類、有機酸類等共計160余種化合物。其中黃酮類化合物和萜類內(nèi)酯是GBE及其制劑質(zhì)量控制的常規(guī)指標，也是GBE的主要活性成分，其能改善心腦血管微循環(huán)、清除氧自由基，在高血壓、動脈硬化、急性腦梗死等心腦血管疾病治療方面療效較好。以GBE為原料加工制成的銀杏葉片、膠囊和滴丸等制劑是目前在歐美非常受歡迎的食用增補劑和藥品。
GBE的化學成分
黃酮類化合物：主要包括黃酮及其苷、雙黃酮、黃酮醇及其苷、花色素等，其含量為2.5%~5.91%。黃酮類化合物有很強的抗氧活性，能清除氧自由基，防止脂質(zhì)過氧化，其中的槲皮素、山萘酚及異鼠李素還可升高血管內(nèi)皮細胞內(nèi)Ca2+濃度，促進NO的合成和釋放，從而舒張血管、改善心腦血管循環(huán)。
萜類內(nèi)酯：共8個，根據(jù)結(jié)構(gòu)分為二萜類的銀杏內(nèi)酯和倍半萜類的白果內(nèi)酯。銀杏內(nèi)酯包括銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、K、L、M，具有抗血小板激活因子活性。萜類內(nèi)酯涉及超氧陰離子清除過程，能保護細胞膜結(jié)構(gòu)，可用于中風、老年癡呆癥等疾病治療。銀杏萜類內(nèi)酯的分離與質(zhì)量控制已成為目前國內(nèi)外研究的熱點。
聚戊烯醇類：目前僅在銀杏葉中發(fā)現(xiàn)，是由10~20個異戊烯基單元線性連接和末端異戊烯醇結(jié)構(gòu)的長鏈化合物，包含順式和反式結(jié)構(gòu)，藥用開發(fā)前景廣闊。
其它有效成分：銀杏提取物中還含有多糖、酚類、有機酸類、氨基酸、微量元素等。
GBE的制備方法
有機溶劑提取法：該法在生產(chǎn)中應用最廣泛，溶劑主要為乙醇-水溶液或丙酮-水溶液。通過將銀杏葉干燥粉碎、浸泡萃取、過濾蒸餾等，得到銀杏葉粗提物。在此基礎(chǔ)上，繼續(xù)采用液-液萃取、沉淀、吸附洗脫等流程可得銀杏葉精提物，該法工藝復雜、耗時長且產(chǎn)率低，產(chǎn)品中的殘留溶劑會影響產(chǎn)品質(zhì)量。近年來樹脂吸附純化法越來越多的被應用在銀杏葉提取工藝中，有研究發(fā)現(xiàn)所采用的吸附樹脂類型和工藝不同，黃酮醇苷和內(nèi)酯都有很好的收率，且各有特點。有研究以銀杏黃酮的吸附性能為指標，篩選10種大孔樹脂發(fā)現(xiàn)，AB-8樹脂吸附性能優(yōu)良，吸附量為102.8mg/g，解析率為97.9%。樹脂吸附法生產(chǎn)工藝具有殘留有機溶劑少、成本低、回收率高的優(yōu)點，在GBE及制劑的制備和生產(chǎn)方面發(fā)展前景廣闊。
超臨界流體提取法：相較于有機溶劑提取法，該法具有安全無毒、無溶劑殘留，活性成分及易揮發(fā)、熱敏性成分損失少、提取效率高等優(yōu)點。通過調(diào)控臨界溫度和壓力、改變改性劑的種類和用量，還可以選擇性的進行目標物萃取和分離純化。有研究建立了一套超臨界CO2萃取小試、中試裝置，并確定了最優(yōu)的實驗參數(shù)進行銀杏葉活性成分提取，得到的GBE中黃酮類和萜類內(nèi)酯的含量均高于國際標準，分別為28%、7.2%。目前超臨界流體提取技術(shù)在中藥活性成分提取的應用越來越廣泛 。
高速逆流色譜技術(shù)提取法：是一種基于液-液分配原理、不需固定載體的新型色譜技術(shù)，其溶劑體系范圍廣、分離效率高、制備量大，非常適合中藥提取物的制備性分離。目前該技術(shù)已經(jīng)開始應用于分離銀杏葉中黃酮類化合物、萜類內(nèi)酯及銀杏酸等，將成為制備銀杏黃酮類和萜類內(nèi)酯的較佳手段。
GBE的質(zhì)量控制
黃酮和萜類內(nèi)酯一直是銀杏葉及其制劑質(zhì)量控制的熱點。
總黃酮醇苷：
總黃酮醇苷是國際公認的銀杏葉及其制劑的質(zhì)量控制指標。銀杏黃酮成分復雜，主要以黃酮苷的形式存在，難以對含量進行直接測定。目前國內(nèi)外標準中，通常先對樣品進行酸解，然后采用高效液相色譜法（HPLC）測定槲皮素、山 奈 素、異鼠李素的含量，再乘以校正系數(shù)來間接反映總黃酮醇苷含量，這種檢測方法不能全面準確的反映產(chǎn)品的信息，在識假、辨假方面不足，有必要直接測定黃酮原形。有報道利用UPLC-MS/MS直接測定GBE中10個黃酮類成分原型，發(fā)現(xiàn)總黃酮含量在不同批次GBE中差異較大，為89.29mg/kg~114.18mg/kg，不同黃酮類成分在同一批次含量差異也較大，該方法可作為黃酮類成分質(zhì)量控制的一個補充。
萜類內(nèi)酯：
GBE的萜類內(nèi)酯化合物主要包括銀杏內(nèi)酯A（GA）、銀杏內(nèi)酯B（GB）、銀杏內(nèi)酯C（GC）和白果內(nèi)酯（BB）。萜類內(nèi)酯的紫外吸收較弱，國內(nèi)外標準中通過反復萃取制備供試品溶液，采用HPLC-ELSD/RID法測定GA、GB、GC和BB含量?！吨袊幍洹?020年版（Chp2020）規(guī)定了四種成分的總含量限度，國外藥典GBE標準除規(guī)定總含量外，還對BB、GA+GB+GC含量范圍進行限制。有報道用HPLC-ELSD法對6個不同廠家的GBE中萜類內(nèi)酯含量檢測發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)廠家雖然四個成分的總含量（5.86%~8.41%）符合中國藥典標準，但是BB含量（1.78%~2.92%）、GA+GB+GC總含量（4.62%~6.39%）并未達到英美藥典要求。因此各GBE廠家有必要參考國外藥典，對產(chǎn)品進行更嚴格的質(zhì)量控制，保證產(chǎn)品質(zhì)量。
不可忽視的**物質(zhì)-銀杏酸
銀杏酸主要為烷基酚酸類化合物，有致敏性、細胞**、胚胎**及神經(jīng)**等，是GBE及其制劑中的需嚴格控制的組分。國內(nèi)外標準均采用HPLC法測定總銀杏酸的含量。目前Chp2020將銀杏酸限度標準由10mg/kg修訂為5mg/kg，與國外標準一致。
值得注意的是，Chp2020新增了指紋圖譜的檢測項，在乙腈-磷酸體系中以HPLC檢測GBE指紋圖譜，以蘆丁定位，與銀杏葉對照提取物指紋圖譜中的17個色譜峰比對，全峰匹配，按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)計算，相似度應≥0.90。此次修訂有利于提高國內(nèi)GBE的產(chǎn)品質(zhì)量。
銀杏及其制劑在國際市場上非常熱銷，其質(zhì)量控制也越來越到重視。目前我國GBE生產(chǎn)廠家很多均遵循《中國藥典》要求進行產(chǎn)品檢測，很少有廠家按照歐、美等國藥典限度要求進行質(zhì)控。這樣導致我國雖然銀杏資源豐富，但產(chǎn)品質(zhì)量不能達到歐美等國家質(zhì)量要求而很少出口到這些國家，國產(chǎn)GBE大部分只能向低質(zhì)量標準國家出口，國際競爭力弱。因此，在原料及工藝方面，國內(nèi)GBE廠家應加強銀杏葉原料質(zhì)量控制，采用高效提取工藝進行生產(chǎn)，并建立標準化的生產(chǎn)流程。在質(zhì)量控制方面，目前，Chp2020僅規(guī)定了總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯的含量下限，建議國內(nèi)廠家應參考國際藥典標準，制定合理的總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯含量范圍。此外，還應考慮增加萜類內(nèi)酯中BB含量范圍和GA+GB+GC總含量范圍，制定出比中國藥典更嚴格的企業(yè)標準，從整體上提升產(chǎn)品質(zhì)量，對于開拓歐美GBE市場有重要意義。
參考文獻：
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[2]唐溱,姜典卓,趙曉霞,張永文. 銀杏葉提取物質(zhì)量標準比較及標準提高思路探討[J]. 中國藥品標準,2020,21(01):21-25.
作者簡介：沙羅，中藥研發(fā)工作者，中藥學碩士，現(xiàn)就職于國內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司，致力于中藥新藥的研究開發(fā)。
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